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PCR儀被分為以下兩類

更新時間:2022-03-28   點擊次數(shù):1529次
   PCR儀是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。實際就是一個溫控設(shè)備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進行溫度控制。PCR擴增儀又稱為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴增儀,是利用PCR(Polymerasechainreaction,聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)對特定DNA擴增的一種儀器設(shè)備,被廣泛運用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實驗室中,例如用于判斷檢體中是否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制以及親子鑒定等。
  
  PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴增,加熱使雙鏈DNA解開螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復(fù)“變性→退火→引物延伸”過程至25~40個循環(huán),呈指數(shù)級擴大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。
  
  PCR分類:
  1、普通型
  一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀。
  用途:主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進行擴增。
 ?。?)梯度:一次PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常為12種溫度梯度的普通。
  用途:研究未知DNA退火溫度的擴增。
  (2)原位PCR:將具有細(xì)胞定位能力的原位雜交技術(shù)運用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析,在細(xì)胞內(nèi)實現(xiàn)基因擴增的普通儀器。
  用途:用于在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進行基因擴增。
  
  2、實時熒光定量PCR儀
  PCR擴增時加入的引物利用熒光素進行標(biāo)記,使引物和熒光探針同時與模板進行特異性結(jié)合,擴增結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號并輸送到計算機分析處理系統(tǒng),實時輸出量化結(jié)果。
  熒光定量有單通道,雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候,選用單通道;有多種熒光標(biāo)記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記和目的基因表達產(chǎn)物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
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